Wild Blue is a Fruit and Field Beer style beer brewed by Anheuser-Busch in Saint Louis, MO. Score: 55 with 1,656 ratings and reviews. Last update: 12-21-2024.
小分子蛋白主要指WB检测中分子量<20kDa的蛋白质,由于分子量小易降解,且带电荷量也相对较少,所以导致其吸附能力比较弱,所以常用的蛋白WB步骤通常会导致检测结果不稳定,时有时无,甚至出现转膜失败、蛋白弥散等完全看不到目标条带的情况。
Wsetern Blot几乎是广大科研人的必修技术,普通蛋白的WB或许可以做的得心应手,但是往往有些磷酸化的蛋白却怎么都做不出来。 本来WB 实验就已经够让人头秃的了,但WB 检测中还有一个疑难杂症——磷酸化蛋白检测。这才是真正检验小伙伴们WB实验操作水平的部分。
另外,wb有些时候不灵,这实验本身就是半定量的,而且步骤繁多很容易出错,相比之下qpcr要好做一些。 有些分泌蛋白,跑WB异常的费劲,我以前就做过一个分泌蛋白的课题,在换了好几批抗体和样品依然无果后,还是选择用qPCR来解决问题。
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尽管绝大多数研究僧在接触该实验时都会被虐的体无完肤,却也在和WB斗志斗勇的过程中积累了不少经验。正所谓前人种树,后人乘凉,现在我就把各位前辈做WB的各种经验总结起来,全文如下↓. 同时,也为大家整理了一份实验 Protocol 资源包。
有些wb还会加入磷酸酶抑制剂,避免磷酸化的蛋白发生去磷酸化。 常见的磷酸酶抑制剂有氟化钠、焦磷酸钠、β-甘油磷酸钠、原矾酸钠等。 发布于 2022-03-16 15:00
由于生物功能的基本单位是蛋白质,所以你的wb最终可能证明你是白用功。 RNA测序研究更多的是关心转录调控,对蛋白质水平的验证往往是RT-qPCR。 各种组学,包括Proteome和Transcriptome,都是撒大网。
要说20年前做wb,那确实麻烦,配胶的时候要注意 神经毒剂 ,配到一半还有可能漏了,还要注意最外面破损的梳子会导致损坏一个进样孔。 甲醇 折腾起来也有点危害,temed还有臭味。。。 不过那时候最多也就是戴个乳胶手套,基本上也就安全了。